Efficacy of a commercial fungal formulation containing Duddingtonia flagrans (Bioverm®) for controlling bovine gastrointestinal nematodes / Eficácia de uma formulação comercial contendo Duddingtonia flagrans (Bioverm®) no controle de nematódeos gastrintestinais de bovinos

Abstract Bioverm® (Duddingtonia flagrans) is a fungal formulation indicated for controlling gastrointestinal nematodes in ruminants and horses, which has recently been authorized for commercialization in Brazil. The objective was to determine the efficiency of Bioverm® against larvae of gastrointestinal nematodes after passage through the gastrointestinal tract of cattle. Twelve animals were used, divided into two groups. In the treated group, a single dose of 1 g of Bioverm® per 10 kg of live weight (containing 105 chlamydospores of D. flagrans) was provided for each animal. Fecal samples were obtained from the animals in each group at 12, 24, 36, 48, 60 and 72 hours after administration. In assay A, 2 g of feces were added to Petri dishes containing 2% agar-water medium. In assay B, coprocultures were performed. In both assays, the peak of larval predation occurred within 48 hours after administration of Bioverm®. In assay A, a significant larval reduction (P < 0.05) was seen at 48 h (88.2%). In assay B, significant reductions (P < 0.05) were seen at 36 h (43.7%) and 48 h (82.3%). Bioverm® showed high predatory capacity after passage through the gastrointestinal tract of cattle and was effective for controlling gastrointestinal nematodes.

Resumo O Bioverm® (Duddingtonia flagrans) é uma formulação fúngica indicada para o controle de nematódeos gastrintestinais de ruminantes e equídeos, recentemente autorizado para a comercialização no Brasil. Objetivou-se determinar a eficiência do Bioverm® contra larvas de nematódeos gastrintestinais após a passagem pelo trato gastrintestinal de bovinos. Foram utilizados doze bovinos divididos em dois grupos. No grupo tratado, foi fornecida, por animal, a dose única de 1g (105 clamidósporos de D. flagrans) do Bioverm® para cada 10 kg de peso vivo. Foram obtidas amostras fecais dos animais de cada grupo a partir de 12, 24, 36, 48, 60 e 72 horas após a administração. No ensaio A, 2g de fezes foram adicionadas em placas de Petri contendo meio ágar-água 2%. No ensaio B, foram realizadas coproculturas. Em ambos os ensaios, o pico de predação larval ocorreu em 48 horas após a administração do Bioverm®. No ensaio A, houve redução larval significativa (P<0,05) em 48h (88,2%). No ensaio B, as reduções significativas (P<0,05) ocorreram em 36h (43,7%) e 48h (82,3%). O Bioverm® apresentou elevada capacidade predatória após a passagem pelo trato gastrintestinal de bovinos, sendo eficaz no controle dos nematódeos gastrintestinais.

Purpureocillium lilacinum and Trichoderma virens for biological control of trichostrongylid parasites of sheep: an in vitro evaluation / Purpureocillium lilacinum e Trichoderma virens no controle biológico de tricostrongilídeos de ovinos: uma avaliação in vitro

Abstract The study evaluated the ovicidal activity of enzymatic extracts of Purpureocillium lilacinum and Trichoderma virens against trichostrongylid eggs from sheep. Filtered extract (FE) and macerated crude extract (MCE) were prepared from fungal cultures in minimal broth. In the experiment, 100 trichostrongylid eggs, obtained from the feces of naturally infected sheep, were exposed to fungal extracts for 24 and 48 hours/25°C. In the control group, eggs were incubated in minimal broth. The number of L1 larvae was ascertained. Each treatment consisted of four repetitions and the experiment was repeated five times. It was observed that the effect of FE and MCE of P. lilacinum and T. virens on egg hatchability differed from that of the control group. MCE of T. virens and P. lilacinum showed higher ovicidal activity than FE over both periods and at 48 hours of exposure, respectively. From the percentage reductions in hatchability of the eggs, MCE was shown to be superior to FE for both fungi. This study demonstrated the ovicidal potential of these fungi against trichostrongylid eggs. However, further studies are needed in order to identify the molecules responsible for the ovicidal effects, and to evaluate the behavior of fungal extracts in biotic and abiotic interactions.

Resumo O estudo avaliou a atividade ovicida de extratos enzimáticos de Purpureocillium lilacinum e Trichoderma virens sobre ovos de tricostrongilídeos de ovinos. Extrato filtrado (EF) e extrato macerado bruto (EMB) foram preparados a partir de culturas fúngicas em caldo mínimo. No ensaio experimental, 100 ovos de tricostrongilídeos, obtidos de fezes de ovinos naturalmente infectados, foram expostos durante 24 e 48 horas/25ºC aos extratos dos fungos. No grupo controle, os ovos foram incubados em caldo mínimo. O número de larvas L1 foi determinado. Cada tratamento consistiu em quatro repetições e o experimento foi repetido cinco vezes. Observou-se que o efeito ovicida do EF e EMB de P. lilacinum e T. virens diferiu do grupo controle. O EMB de T. virens e P. lilacinum evidenciou atividade ovicida superior ao EF em ambos os períodos avaliados e em 48 horas de exposição, respectivamente. O percentual de redução de eclodibilidade evidenciou que o EMB foi superior ao EF em ambos os fungos. Este estudo demonstra o potencial ovicida desses fungos sobre ovos de tricostrongilídeos. No entanto, estudos adicionais são necessários para identificar as moléculas responsáveis pelo efeito ovicida, bem como avaliar o comportamento dos extratos fúngicos em interações bióticas e abióticas.

Rhabditis spp, in the Espírito Santo, State of Brazil and evaluation of biological control / Rhabditis spp, no Espírito Santo, estado do Brasil e avaliação do controle biológico

Abstract The objectives of this study were to describe occurrences of Rhabditis spp. causing parasitic otitis in dairy cattle of Gir breed in the state of Espírito Santo, southeastern Brazil, and to evaluate the biological control of this nematode using the nematophagous fungi Duddingtonia flagrans (AC001) and Monacrosporium thaumasium (NF34). After nematode detection and collection, three groups were formed: two groups that were treated, respectively, with the fungal isolates; and a control group, without fungus. The treatments were as follows: (a) Petri dishes containing the culture medium 2% water agar (WA) + 250 nematodes + AC001; (b) Petri dishes containing 2% WA + 250 nematodes + NF34; and (c) Petri dishes containing only 2% WA + 250 nematodes. After seven days at 27 °C the treatments with fungi were able to capture and destroy the nematodes, with percentages of 82.0% (AC001) and 39.0% (NF34) in relation to the control group. The results demonstrate the occurrence of Rhabditis spp. after animals physical examination and that there was efficacy of the in vitro predatory activity of both fungal isolates. Thus, these results are important because they can assist in future in vivo control of this nematode in cattle.

Resumo Os objetivos neste estudo foram descrever ocorrências do nematódeo Rhabditis spp., causando otite parasitária em bovinos leiteiros da raça Gir no estado do Espírito Santo, sudeste do Brasil, e avaliar o controle biológico desse nematódeo utilizando os fungos nematófagos Duddingtonia flagrans (AC001) e Monacrosporium thaumasium (NF34). Após a detecção e coleta dos nematódeos, três grupos foram formados: dois grupos que foram tratados com os isolados fúngicos, respectivamente; e um grupo controle, sem fungos. Os tratamentos foram os seguintes: (a) placas de Petri contendo o meio de cultura 2% ágar de água (WA) + 250 nematoides + AC001; (b) placas de Petri contendo 2% de WA + 250 nematoides + NF34; e (c) placas de contendo apenas 2% de nematódeos WA + 250. Após sete dias a 27 °C os tratamentos com fungos foram capazes de capturar e destruir os nematódeos, com porcentagens de 82,0% (AC001) e 39,0% (NF34) em relação ao grupo controle. Os resultados demonstram a ocorrência de Rhabditis spp., no Estado do Espírito Santo e a eficácia da atividade predatória in vitro dos isolados fúngicos utilizados. Assim, esses resultados são importantes, pois podem auxiliar no controle alternativo in vivo de Rhabditis spp. em bovinos com otite parasitária.

Predatory viability of the nematophagous fungus Duddingtonia flagrans on the infective larvae of gastrointestinal nematodes of sheep following storage and refrigeration / Viabilidade predatória do fungo nematófago Duddingtonia flagrans sobre larvas infectantes de nematódeos gastrintestinais de ovinos após armazenamento e refrigeração

The objective of this study was to evaluate the in vivo predatory viability of the nematophagous fungus, Duddingtonia flagrans, after storage (36 months) and refrigeration (2-8 °C). This viability was evaluated using the infective larvae of gastrointestinal nematodes of sheep in the Northeastern semi-arid region of Brazil. Sixteen Santa Inês sheep with negative counting of eggs per gram of feces (EPG) were divided into four experimental groups, each group comprised of four animals. The pellets were administered at the dose of 3 g/10 kg of live weight (20% fungal micelyum), and a single administration was performed for each animal. Group I was administered pellets that had been stored for 36 months; Group II, freshly produced pellets; Group III, freshly produced pellets that did not contain fungi; and Group IV, pellets were not administered, and this was the control group. Feces were collected for 5 days, every 24 h for analysis. There was a significant decrease in the number of infective larvae of sheep nematodes that received D. flagrans pellets in a sodium alginate matrix, 82% was observed for Group I and 71% for Group II, compared to the control group. It is therefore concluded that the fungus, D. flagrans, pelleted in sodium alginate matrix after 36 months of storage at 2-8 °C, showed efficacy in reducing the number of infective larvae of gastrointestinal nematodes of sheep. (AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar a viabilidade predatória in vivo do fungo nematófago Duddingtonia flagrans, após armazenamento (36 meses) e refrigeração (2-8 °C). Esta viabilidade foi avaliada utilizando larvas infectantes de nematódeos gastrintestinais de ovinos no semi-árido nordestino do Brasil. 16 ovinos Santa Inês com contagem negativa de ovos por grama de fezes (GEP) foram divididos em quatro grupos experimentais, compostos por quatro animais. Os péletes foram administrados na dose de 3 g/10 kg de peso vivo (20% de micélio fúngico), e uma única administração foi realizada para cada animal. Grupo I foi administrado péletes que foram armazenados por 36 meses; Grupo II, péletes recém-produzidos; Grupo III, péletes recém-produzidos que não continham fungos; e o Grupo IV, péletes não foram administrados, e este foi o grupo controle. As fezes foram coletadas por cinco dias, a cada 24 horas, para análise. Houve uma diminuição significativa no número de larvas infectantes de nematóides ovinos que receberam pellets de D. flagrans, 82% foi observado para o Grupo I e 71% para o Grupo II, comparado ao grupo controle. Conclui-se, portanto, que o fungo D. flagrans, peletizado em matriz de alginato de sódio após 36 meses de armazenamento a 2-8 °C, apresenta eficácia na redução do número de larvas infectantes de nematódeos gastrintestinais de ovinos.(AU)

Control of sheep gastrointestinal nematodes using the combination of Duddingtonia flagrans and Levamisole Hydrochloride 5% / Controle de nematódeos gastrintestinais de ovinos utilizando a combinação de Duddingtonia flagrans e Cloridrato de Levamisole 5%

Abstract The objective was to evaluate the action of D. flagrans pellets in association with Levamisole Hydrochloride 5% for controlling sheep gastrointestinal nematodes in the northeastern Brazil. Three groups of six sheep each were formed: group 1 received 3 g of the pellets (0.6 g of D. flagrans mycelium) for each 10 kg b.w., twice a week for six months, and deworming with Levamisole Hydrochloride 5% when EPG ≥ 1500; group 2 received a dosage of Levamisole Hydrochloride 5% when EPG ≥ 1500; and group 3 received 3 g of pellets without fungi for each 10 kg b.w., twice a week for six months. EPG counts, larval cultures, packed cell volume (PCV) and weighing were performed every 15 days; monthly, samples of grass from each paddock were collected. The mean EPG of the groups began to statistically differ from day 30 (p < 0.05). Group 1 required less deworming with Levamisole Hydrochloride 5% and showed superiority of PCV values ​​throughout the experiment (p < 0.05). There was a significant reduction (p < 0.05) in L3 recovery in the group 1 paddock from day 30 onwards. The use of D. flagrans pellets in association with Levamisole Hydrochloride 5% was effective for controlling gastrointestinal nematodes.

Resumo O objetivo foi avaliar a ação de péletes de Duddingtonia flagrans em associação ao Cloridrato de Levamisole 5% no controle de nematódeos gastrintestinais de ovinos no Nordeste do Brasil. Foram formados três grupos de seis animais cada: grupo 1 recebeu 3 g de péletes (0,6 g de micélio de D. flagrans) para cada 10 kg p.v., duaz vezes por semana durante seis meses, e vermifugações com Cloridrato de Levamisole 5% quando OPG > 1500; grupo 2 recebeu uma dosagem de Cloridrato de Levamisole 5% quando OPG ≥ 1500; e grupo 3 recebeu 3 g de péletes sem fungos para cada 10 kg de p.v., duas vezes por semana durante seis meses. Contagens de OPG, coproculturas, de volumes globulares (VG) e pesagens foram realizadas a cada 15 dias. Mensalmente, amostras de pasto de cada piquete eram coletadasa. A média de OPG dos grupos começou a diferir estatisticamente a partir do dia 30 (p < 0,05). O grupo 1 necessitou de menos vermifugações com Cloridrato de Levamisole 5% e demonstrou superioridade nos valores de VG durante todo o experimento (p < 0,05). Houve redução significativa (p < 0,05) nas L3 recuperadas no piquete do grupo 1 a partir do dia 30. Em conclusão, a utilização de péletes de D. flagrans em associação ao Cloridrato de Levamisole 5% foi eficaz no controle de nematódeos gastrintestinais de ovinos.

In vitro susceptibility of nematophagous fungi to antiparasitic drugs: interactions and implications for biological control / Suscetibilidade in vitro de fungos nematófagos à antiparasitários: interações e implicações para o controle biológico

Abstract The fast anthelmintic resistance development has shown a limited efficiency in the control of animal's endoparasitosis and has promoted research using alternative control methods. The use of chemicals in animal anthelmintic treatment, in association with nematophagous fungi used for biological control, is a strategy that has proven to be effective in reducing the nematode population density in farm animals. This study aims to verify the in vitro susceptibility of the nematophagous fungi Arthrobotrys oligospora, Duddingtonia flagrans and Paecilomyces lilacinus against the antiparasitic drugs albendazole, thiabendazole, ivermectin, levamisole and closantel by using the Minimum Inhibitory Concentration (MIC). MICs ranged between 4.0 and 0.031 µg/mL for albendazole, thiabendazole and ivermectin, between 0.937 and 0.117 µg/mL for levamisole, and between 0.625 and 0.034 µg/mL for closantel. The results showed that all antiparasitic drugs had an in vitro inhibitory effect on nematophagous fungi, which could compromise their action as agents of biological control. D. flagrans was the most susceptible species to all drugs.

Resumo O desenvolvimento rápido da resistência anti-helmíntica demonstrou a eficiência limitada no controle de endoparasitoses em animais, e promoveu a investigação em métodos de controles alternativos. O uso de produtos químicos no tratamento anti-helmíntico animal, em associação com fungos nematófagos utilizados para o controlo biológico, é uma estratégia que tem provado ser eficaz na redução da densidade da população de nematódeos em animais agrícolas. Este estudo teve como objetivo verificar a suscetibilidade in vitro dos fungos nematófagos Arthrobotrys oligospora, Duddingtonia flagrans e Paecilomyces lilacinus frente aos antiparasitários albendazol, tiabendazol, ivermectina, levamisol e closantel, usando a concentração inibitória mínima (MIC). Os MICs variaram entre 4,0 e 0,031 μg/mL para albendazol, tiabendazol e ivermectina, entre 0,937 e 0,117 μg/mL para o levamisol, e entre 0,625 e 0,034 μg/mL para closantel. Os resultados mostraram que todos os antiparasitários tiveram um efeito inibidor in vitro sobre os fungos nematófagos, o que poderia comprometer suas atividades como agentes de controle biológico. D. flagrans foi a espécie mais sensível a todas as drogas.

In vitro susceptibility of nematophagous fungi to antiparasitic drugs: interactions and implications for biological control

Abstract The fast anthelmintic resistance development has shown a limited efficiency in the control of animals endoparasitosis and has promoted research using alternative control methods. The use of chemicals in animal anthelmintic treatment, in association with nematophagous fungi used for biological control, is a strategy that has proven to be effective in reducing the nematode population density in farm animals. This study aims to verify the in vitro susceptibility of the nematophagous fungi Arthrobotrys oligospora, Duddingtonia flagrans and Paecilomyces lilacinus against the antiparasitic drugs albendazole, thiabendazole, ivermectin, levamisole and closantel by using the Minimum Inhibitory Concentration (MIC). MICs ranged between 4.0 and 0.031 µg/mL for albendazole, thiabendazole and ivermectin, between 0.937 and 0.117 µg/mL for levamisole, and between 0.625 and 0.034 µg/mL for closantel. The results showed that all antiparasitic drugs had an in vitro inhibitory effect on nematophagous fungi, which could compromise their action as agents of biological control. D. flagrans was the most susceptible species to all drugs.

Resumo O desenvolvimento rápido da resistência anti-helmíntica demonstrou a eficiência limitada no controle de endoparasitoses em animais, e promoveu a investigação em métodos de controles alternativos. O uso de produtos químicos no tratamento anti-helmíntico animal, em associação com fungos nematófagos utilizados para o controlo biológico, é uma estratégia que tem provado ser eficaz na redução da densidade da população de nematódeos em animais agrícolas. Este estudo teve como objetivo verificar a suscetibilidade in vitro dos fungos nematófagos Arthrobotrys oligospora, Duddingtonia flagrans e Paecilomyces lilacinus frente aos antiparasitários albendazol, tiabendazol, ivermectina, levamisol e closantel, usando a concentração inibitória mínima (MIC). Os MICs variaram entre 4,0 e 0,031 g/mL para albendazol, tiabendazol e ivermectina, entre 0,937 e 0,117 g/mL para o levamisol, e entre 0,625 e 0,034 g/mL para closantel. Os resultados mostraram que todos os antiparasitários tiveram um efeito inibidor in vitro sobre os fungos nematófagos, o que poderia comprometer suas atividades como agentes de controle biológico. D. flagrans foi a espécie mais sensível a todas as drogas.

Duddingtonia flagrans no controle de nematoides gastrintestinais de equinos em fases de vida livre / Control of free living gastrointestinal nematodes of horses using Duddingtonia flagrans

O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade predatória do fungo Duddingtonia flagrans contra larvas infectantes (L3) de nematoides gastrintestinais na pastagem e no bolo fecal de equinos, em um período de 21 dias. O delineamento experimental foi inteiramente ao acaso, com três grupos tratados (G1, G2 e G3) e um controle (C), com oito animais/grupo. Os tratados receberam 1,5x105; 3x105 e 6x105 clamidósporos de D. flagrans/kg-1peso vivo animal, G1, G2 e G3, respectivamente, durante 21 dias, com administração a cada três dias. Foram delimitadas 36 áreas de 1m2 cada, equivalendo a repetições em triplicata para cada grupo. As fezes foram coletadas dos animais nos dias 0 (D0), 15 (D15) e 30 (D30 = sete dias após a última administração dos tratamentos) e depositadas nessas áreas de pastagem. O número de larvas presentes nos bolos fecais e na pastagem foi avaliado após 14 e 21 dias de cada etapa de deposição. A avaliação da atividade predatória de D. flagrans na pastagem e nos bolos fecais demonstrou que a redução do número de L3 nos bolos fecais foi acompanhada pelo aumento da variável na pastagem. Não se constatou diferença significativa entre os grupos avaliados em decorrência da temperatura média registrada durante o período. As avaliações realizadas em um curto período podem ser insuficientes para a avaliação do efeito do fungo.(AU)

The aim of this study was to evaluate the predatory activity of the fungus Duddingtonia flagrans against infective larvae (L3 ) of gastrointestinal nematodes of horses in the pasture and dung patch during a period of 21 days. The experimental design was completely randomized, with three groups treated (G1, G2 and G3) and a control (C), with eight animals/group. The treated animals received G1: 1.5x105; G2: 3x105 and G3: 6x105 chlamydospores of D. flagrans/kg body weight during 21 days. The experiment ran in the environment using 36 areas of 1 m2 delimited on pasture, where stool samples were distributed for each group, in triplicates. Feces were collected from the animals at days 0 (D0), 15 (D15) and 30 (D30) and deposited on the pasture areas. After 14 and 21 days of each deposition step , the number of L 3 present in dung and pasture was evaluated. The number of L3 in the dung was accompanied by increase of the same variable in the pasture. The evaluation recorded in a short period may be insufficient to evaluate fungus development.(AU)

Producción de conidios y clamidosporas de los hongos Duddingtonia flagrans y Monacrosporium thaumasium en diferentes medios sólidos / Produção de conídios e clamidósporos de Dunddingtonia flagrans e Monacrosporium thaumasium em diferentes meios sólidos / Production of conidia and clamidospores of Duddingtonia flagrans and Monacrosporium thaumasium fungi in different solid media

Las especies Duddingtonia flagrans y Monacrosporium thaumasium son micro-hongos considerados promisorios agentes del control biológico de parásitos. Bajo condiciones adversas como la falta de nutrientes, estos hongos producen esporas capaces de sobrevivieren después de pasar por el tracto gastrointestinal de los animales. La formación de estas estructuras es una característica deseable ya que promueve la sobrevivencia y la diseminación de los hongos para propósitos de biocontrol. El objetivo de este estudio fue evaluar la producción de esporas de dos especies de hongos nematófagos D. flagrans (aislados AC001 y CG722) y M. thaumasium (NF34A). Estos fueron cultivados en los subproductos agroindustriales, que tenían el intento de identificar el mejor medio para uso en programas de biocontrol de nematodos. Diferentes volúmenes (10, 15 y 20 mL) de masa micelial fueron utilizados como inóculos iniciales y adicionados a 100 gramos de medios de crecimientos sólidos (sémola de arroz - QA; sémola de maíz - QM; bagazo de caña - BC; paja de arroz - PA y cascara de café - CC) y mantenidos a 25°C en la obscuridad para evaluar la producción de esporas. Los aislados AC001 y CG722 mostraron las mejores producciones en el medio de la QA (p<0,05). El volumen de 20 mL de masa micelial utilizado como inóculo inicial proporcionó una mayor recuperación de esporas. El aislado NF34A presentó una baja o nula producción de estructuras reproductivas en los diferentes volúmenes y medios de crecimientos utilizados. La mejor producción de esporas se obtuvo utilizando subproductos de la agroindustria con mayor densidad proteica y energética.(AU)

As espécies Duddingtonia flagrans e Monacrosporium thaumasium são microfungos considerados promissores agentes de controle biológico de parasitos. Sob condições adversas, como a falta de nutrientes, estes fungos produzem esporos capazes de sobreviverem após a passagem pelo trato gastrintestinal dos animais. A formação destas estruturas é uma característica desejável, já que promove a sobrevivência fúngica e a sua disseminação para fins de biocontrole. Este estudo teve como objetivo avaliar a produção de esporos das espécies de fungos nematófagos D. flagrans (isolados AC001 e CG722) e M. thaumasium (NF34A). Estes foram cultivados em subprodutos agroindustriais, a fim de identificar o melhor meio para uso em programas de controle biológico de nematoides. Diferentes volumes de massa micelial (10, 15 e 20 mL) foram utilizados como inóculo inicial e adicionados sobre 100 gramas dos meios de crescimento sólidos (quirera de arroz - QA; quirera de milho - QM; bagaço de cana - BC; palha de arroz - PA e casca de café - CC) e mantidos a 25°C ao abrigo da luz para avaliar a produção de esporos. Os isolados AC001 e CG722 mostraram as melhores produções no meio QA (p<0,05). O volume de 20 mL de massa micelial usado como inóculo inicial permitiu maior recuperação de esporos. O isolado NF34A apresentou produção baixa ou nula de estruturas reprodutivas nos diferentes volumes e meios de crescimento utilizados. A melhor produção de esporos foi obtida nos subprodutos agroindustriais com maior densidade proteica/energética.(AU)

Optimization of protease production by the fungus Monacrosporium thaumasium and its action against Angiostrongylus vasorum larvae / Otimização da produção de protease pelo fungo Monacrosporium thaumasium e sua ação contra larvas de Angiostrongylus vasorum

The objectives of this study were to optimize protease production from the nematophagous fungus Monacrosporium thaumasium (NF34a) and evaluate its larvicidal activity and biological stability. An isolate of the nematophagous fungus Monacrosporium thaumasium (NF34a) was used to produce the enzyme. The Plackett-Burman design was used in order to scan which components of the culture medium could have a significant influence on protease production by the fungus NF34a. An in vitro assay was also performed to evaluate the larvicidal activity of NF34a. It was observed that only one component of the culture medium (yeast extract), at the levels studied, had any significant effect (p < 0.05) on protease production. There was a reduction (p < 0.01) in the mean number of larvae recovered from the treated groups, compared with the control groups. The results confirm previous reports on the efficiency of nematophagous fungi for controlling nematode larvae that are potentially zoonotic. Thus, given the importance of biological control, we suggest that further studies should be conducted on the protease produced by the fungus Monacrosporium thaumasium.

O objetivo deste trabalho foi otimizar a produção de proteases do fungo nematófago Monacrosporium thaumasium (NF34a), avaliar sua atividade larvicida e sua estabilidade biológica. Foi utilizado um isolado do fungo nematófago Monacrosporium thaumasium (NF34a) para a produção de enzima. O delineamento Plackett-Burman foi utilizado com o objetivo de se escanear quais componentes do meio de cultura, poderiam ter influência significava na produção de protease pelo fungo NF34a. Foi realizado um ensaio in vitro para avaliar a atividade larvicida de NF34a. Observou-se que apenas um dos componentes do meio de cultura (extrato de levedura), nos níveis avaliados, apresentou um efeito significativo (p < 0,05) sobre a produção de protease. Houve redução (p < 0,01) entre as médias de larvas recuperadas dos grupos tratados em relação às dos grupos controle. Os resultados confirmam trabalhos anteriores da eficiência de fungos nematófagos no controle de larvas de nematóides potencialmente zoonóticos. Assim, devido a importância do controle biológico, os autores sugerem estudos mais aprofundados sobre a protease produzida pelo fungo Monacrosporium thaumasium.

Control of infective larvae of gastrointestinal nematodes in heifers using different isolates of nematophagous fungi / Controle de larvas infectantes de nematóides gastrintestinais de novilhas por diferentes isolados dos fungos nematófagos

The effect of different nematophagous fungi [Duddingtonia flagrans (AC001 and CG722) and Monacrosporium thaumasium (NF34)] with regard to controlling infective larvae (L3) of nematodes after gastrointestinal transit in female cattle (3/4 Holstein × Zebu) was evaluated. A total of 24 pubescent female cattle were used, weighing approximately 320 kg each one. There were three treatment groups, each contained six animals that received 150 g of pellets (0.2 g of mycelium), orally in a single dose, in a sodium alginate matrix containing mycelial mass of the fungus D. flagrans (AC001 or CG722) or M. thaumasium (NF34); and one control group (without fungi). Fecal samples were collected from the animals at intervals of 12, 15, 18, 21, 24, 48, and 72 hours. At the end of 17 days, the L3 not subjected to predation were recovered by means of the Baermann method. The fungal isolates tested were capable of destroying the L3 after gastrointestinal transit. It was observed that within 72 hours, the isolates AC001, CG722, and NF34 showed a higher predatory activity (81.2%, 97.3%, and 98.3%, respectively). The results justify the need for studies in the field, and over longer intervals, in order to observe the efficiency of the fungus D. flagrans, or even M. thaumasium, for environmental control over nematodes in naturally infected cattle.

No presente estudo, foi avaliado o efeito de diferentes fungos nematófagos [Duddingtonia flagrans (AC001 e CG722) eMonacrosporium thaumasium (NF34)] no controle de larvas infectantes (L3) de nematóides após o trânsito gastrointestinal em fêmeas bovinas (3/4 Holandês x Zebu). Um total de 24 fêmeas bovinas pubescentes foram utilizadas, pesando aproximadamente 320 kg cada. Foram utilizados três grupos de tratamento; cada um contendo seis animais que receberam por via oral de 150 g de péletes (0,2 g de micélio), em dose única, em uma matriz de alginato de sódio contendo massa micelial dos fungos D. flagrans (AC001 ou CG722), M. thaumasium (NF34), além de um grupo controle (sem fungo). Amostras de fezes foram colhidas dos animais em intervalos de 12, 15, 18, 21, 24, 48 e 72 horas. No final de 17 dias, as L3 não predadas foram recuperadas pelo método de Baermann. Os isolados de fungos testados foram capazes de destruir as L3 após trânsito gastrointestinal. Observou-se após 72 horas, os isolados AC001, CG722 e NF34 mostraram uma maior atividade predatória (81,2%, 97,3% e 98,3%, respectivamente). Estes resultados justificam a necessidade de estudos a campo e em intervalos mais longos, a fim de observar a eficácia dos fungos D. flagrans ou mesmoM. thaumasium no controle ambiental dos nematóides de bovinos naturalmente infectados.

First report of interaction of nematophagous fungi on Libyostrongylus douglassii (Nematoda: Trichostrongylidae) / Primeiro relato da interação de fungos nematófagos sobre Libyostrongylus douglassii (Nematoda: Trichostrongilidae)

Libyostrongylus douglassii is a gastrointestinal nematode parasite of ostriches that can cause up to 50% mortality in young birds. The objective of this study was to compare the predatory capacity of two isolates of the predatory fungi Duddingtonia flagrans(AC001 and CG722 isolates) and one of Arthrobotrys cladodes (CG719) on infective larvae (L3) of L. douglassii under laboratory conditions, in 2% water-agar medium. The results showed that the fungi tested were effective in preying upon the L3 of L. douglassii (P < 0.05), compared with the control group. However, there was no difference in predatory capacity between the fungi tested (P > 0.05) during the seven days of experimental testing. In comparison with the control, without fungus, there were significant decreases (P < 0.05) of 85.2% (AC001), 81.2% (CG722) and 89.2% (CG719) in the average numbers of L3 of L. douglassii recovered from treatments with the isolates tested. In the present study, the three isolates of the predatory fungi D. flagrans (AC001 and CG722) and A. cladodes (CG719) were efficient at in vitro destruction of the L3 of L. douglassii.

Libyostrongylus douglassii é um nematóide parasito gastrintestinal de avestruzes que pode causar até 50% de mortalidade em aves jovens. O objetivo deste trabalho foi comparar a capacidade predatória de dois isolados de fungos predadores Duddingtonia flagrans (isolados AC001 e CG722) e um Arthrobotrys cladodes (CG719) sobre larvas infectantes (L3) de L. douglassii em condições laboratoriais, em meio ágar­água 2%. Os resultados demonstraram que os fungos testados foram eficientes em predar as L3 de L. douglassii (P < 0,05) em relação ao grupo controle. Contudo, não foi observada nenhuma diferença na capacidade predatória entre os fungos testados (P > 0,05) durante os sete dias do ensaio experimental. Em comparação ao controle, sem fungo, houve uma redução significativa (P < 0,05) de 85,2% (AC001); 81,2% (CG722) e 89,2% (C719) na média de L3 recuperadas nas placas do grupo tratado com os isolados testados. No presente trabalho, os três isolados de fungos predadores D. flagrans (AC001 e CG722) e A. cladodes (CG719) foram eficientes na destruição in vitro das L3 de L. douglassii.

Proteolytic action of the crude extract of Duddingtonia flagrans on cyathostomins (Nematoda: Cyathostominae) in coprocultures / Ação proteolítica do extrato bruto de Duddingtonia flagrans sobre ciatostomíneos (Nematoda: Cyathostominae) em coproculturas

The objective of this study was to examine the action of the crude extract of Duddingtonia flagrans (isolates AC001 and CG722) on infective larvae (L3) of cyathostomins in coprocultures and to confirm its proteolytic activity by means of a zymogram. The following groups were formed in coprocultures: Group 1: 10 mL of crude extract of D. flagrans (AC001); group 2: 10 mL of crude extract of AC001 with 10 mM of Ca2+; group 3: 10 mL of crude extract of D. flagrans (CG722); group 4: 10 mL of crude extract of CG722 with 10 mM of Ca2+; and group 5: control group (distilled water). The third-stage larvae (L3) were obtained after eight days. The crude extract of D. flagrans was effective in reducing the number of L3, with the following percentage reductions: group 1, 49.5%; group 2, 52.5%; group 3, 36.8%; and group 4, 57.7%; in relation to the control group (p > 0.05). The proteolytic activity of the crude extract was confirmed through the zymogram. The results from this study confirmed that the crude extract of the fungus D. flagrans could be used for controlling cyathostomin L3, and suggested that at least one protease of approximately 38 kDa was present.

O objetivo deste trabalho foi estudar a ação do extrato bruto de Duddingtonia flagrans (isolados AC001 e CG722) sobre larvas infectantes (L3) de ciatostomíneos em coproculturas e confirmar a sua atividade proteolítica por meio de um zimograma. Foram formados os seguintes grupos em coproculturas: grupo 1: 10 mL de extrato bruto de D. flagrans (AC001); grupo 2: 10 mL de extrato bruto de AC001 com íons Ca2+ 10 Mm; grupo 3: 10 mL de extrato bruto de D. flagrans (CG722); grupo 4: 10 mL de extrato bruto de CG722 com íons Ca2+ 10 Mm; e grupo 5 como controle (água destilada), obtendo-se as L3 ao final de 8 dias. O extrato bruto de D. flagrans foi eficiente na redução do número de L3 com os seguintes percentuais de redução: grupo 1 (49,5%); grupo 2 (52,5%); grupo 3 (36,8%) e grupo 4 (57,7%) em relação ao grupo controle (p > 0,05). Confirmou-se a atividade proteolítica por meio do zimograma. Os resultados do presente trabalho confirmam a utilização do extrato bruto do fungo D. flagrans no controle de L3 de ciatostomíneos e sugere a presença de pelo menos uma protease de aproximadamente 38 kDa.

Predatory activity of chlamydospores of the fungus Pochonia chlamydosporia on Toxocara canis eggs under laboratory conditions / Atividade predatória de clamidósporos do fungo Pochonia chlamydosporia sobre ovos de Toxocara canis em condições laboratoriais

The objective of this study was to use chlamydospores of the fungus Pochonia chlamydosporia (isolates VC1 and VC4) against Toxocara canis eggs in a 15-day in vitro assay. One thousand T. canis eggs were placed in Petri dishes containing 2% water agar medium with different concentrations of chlamydospores (1,000, 10,000 or 100,000) of each fungal isolate of P. chlamydosporia (treated groups) and 1,000 eggs in Petri dishes without fungus (control group). Egg counts were performed to determine the ovicidal activity, which was classified as three effect levels: type 1, type 2 and type 3. Significant differences (P < 0.01) in egg destruction were found in comparison with the control group. The highest percentage of egg destruction was found in plates containing 100,000 chlamydospores (68.5% for VC1 and 70.5% for VC4). Chlamydospores of P. chlamydosporia were effective in destroying T. canis eggs and may contribute in the future towards combating the eggs of this parasite.

O objetivo do trabalho foi utilizar clamidósporos do fungo Pochonia chlamydosporia (isolados VC1 e VC4) na destruição de ovos de Toxocara canis, num ensaio in vitro, realizado no intervalo de 15 dias. Em cada placa de Petri com ágar-água 2% foram vertidos 1.000 ovos de T. canis em 1.000, 10.000 ou 100.000 clamidósporos de cada isolado do fungo (grupos tratados). Foram realizadas as contagens para verificar a atividade ovicida, classificada em três níveis de efeito: tipo 1, tipo 2 e tipo 3. Os resultados demonstraram que houve diferença significativa (P < 0,01) na destruição dos ovos em relação aos ovos observados nas placas do grupo controle. O maior percentual de ovos destruídos foi observado nas placas contendo 100.000 clamidósporos (68,5% para VC1 e 70,5% para VC4). Clamidósporos do fungo P. chlamydosporia foram efetivos na destruição dos ovos de T. canis podendo contribuir no futuro para o combate aos ovos deste parasito.

In vitro biological control of infective larvae of Ancylostoma ceylanicum / Controle biológico in vitro de larvas infectantes de Ancylostoma ceylanicum

The aim of this study was to evaluate the predatory activity of the fungus Duddingtonia flagrans (AC001) on infective larvae of Ancylostoma ceylanicum after gastrointestinal transit in hamsters. Twenty animals were used in the experiment, divided into two groups: a treated group (10 animals) and a control group (10 animals). In the group treated with D. flagrans, each animal received mycelium from the AC001 isolate, at an oral dose of 5 mg/25 g of live weight. To evaluate the predatory activity of the fungus, fecal samples were collected from the animals in both groups, at the times of 6, 8, 12, 24 and 36 hours after the treatment. Then, subsamples of 2 g of feces were placed in Petri dishes containing 2% water-agar (2% WA) culture medium and 1000 L3 of A. ceylanicum. Over the study period, the following percentage reductions were observed: 43.2% (6 hours), 30.8% (8 hours), 25.8% (12 hours), 30% (24 hours) and 11% (36 hours). The fungus D. flagrans presented predatory activity on the L3 of A. ceylanicum, after passing through the hamsters' gastrointestinal tract. It was therefore concluded that the fungus D. flagrans may be an alternative for biological control of the L3 of A. ceylanicum.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade predatória do fungo Duddingtonia flagrans (AC001) sobre larvas infectantes de Ancylostoma ceylanicum após o trânsito gastrintestinal em hamsters. Foram utilizados vinte animais no experimento, divididos em dois grupos: um grupo tratado (10 animais) e um grupo controle (10 animais). No grupo tratado com D. flagrans, cada animal recebeu 5mg/25g de peso vivo de micélio do isolado AC001, por via oral. Para avaliar a atividade predatória do fungo, amostras fecais foram coletadas de ambos os grupos de animais nos horários de: 6, 8, 12, 24 e 36 após o tratamento. A seguir, 2g de fezes foram colocadas em placas de Petri contendo o meio de cultura ágar-água 2% (AA2%) e 1000 L3 de A. ceylanicum. Ao longo dos horários estudados os seguintes percentuais de redução foram observados: 43,2% (6 horas); 30,8% (8 horas); 25,8% (12 horas); 30% (24 horas) e 11% (36 horas). O fungo D. flagrans (AC001) apresentou atividade predatória sobre as L3 de A. ceylanicum após o trânsito pelo trato gastrintestinal de hamsters. Além disso, foi observada uma diferença significativa nos percentuais obtidos de cada horário em relação ao numero de L3 recuperadas (P < 0,01). Conclui-se, portanto, que o fungo D. flagrans pode ser uma alternativa de controle biológico das L3 de A. ceylanicum.

Control of Strongyloides westeri by nematophagous fungi after passage through the gastrointestinal tract of donkeys / Controle de Strongyloides westeri por fungos nematófagos após trânsito gastrintestinal em jumentas

Strongyloides westeri is the most prevalent nematode among equines aged up to four months and causes gastrointestinal disorders. The objective of this study was to observe the control of infective S. westeri larvae (L3) by the nematophagous fungi Duddingtonia flagrans (AC001) and Monacrosporium thaumasium (NF34) after passage through the gastrointestinal tract of female donkeys. Twelve dewormed female donkeys that were kept in stables were used. Two treatment groups each comprising four animals received orally 100 g of pellets made of sodium alginate matrix containing a mycelial mass of either D. flagrans (AC001) or M. thaumasium (NF34). The control group consisted of four animals that received pellets without fungus. Feces samples were then collected from the animal groups at different times (after 12, 24, 48 and 72 hours). These feces were placed in Petri dishes containing 2% water-agar medium and 1000 L3 of S. westeri. AC001 and NF34 isolates showed the ability to destroy the L3, after gastrointestinal transit, thus demonstrating their viability and predatory activity.

O Strongyloides westeri é o nematóide de maior prevalência entre equídeos com idade até quatro meses, causando distúrbios gastrintestinais. O objetivo do presente trabalho foi observar o controle de larvas infectantes (L3) de Strongyloides westeri pelos fungos nematófagos Duddingtonia flagrans (AC001) e Monacrosporium thaumasium (NF34) após trânsito gastrintestinal em jumentas. Foram utilizadas 12 jumentas, estabuladas e previamente vermifugadas. A seguir, dois grupos tratados, contendo cada um 4 animais receberam por via oral 100 g de péletes em matriz de alginato de sódio, contendo massa miceliana dos fungos D. flagrans (AC001) ou M. thaumasium (NF34). O grupo controle foi constituído de 4 animais que receberam péletes sem fungo. A seguir, amostras de fezes dos grupos de animais foram coletadas em distintos intervalos de horas (12, 24, 48 e 72). Essas fezes foram vertidas em placas de Petri contendo meio sólido ágar-água 2% e 1000 L3 de S. westeri. Os isolados AC001 e NF34 apresentaram capacidade de destruir as L3 após o trânsito, demonstrando sua viabilidade e atividade predatória.

Atividade larvicida do extrato bruto enzimático do fungo Duddingtonia flagras sobre larvas de primeiro estádio de Angiostrongylus vasorum / Larvicidal activity of a crude enzyme extract of the fungus Duddingtonia flagrans on first-stage larvae of Angiostrongylus vasorum

INTRODUÇÃO: Angiostrongylus vasorum é um nematóide que parasita cães domésticos e eventualmente o homem. MÉTODOS: O objetivo deste trabalho foi observar a atividade predatória in vitro do extrato bruto enzimático do fungo Duddingtonia flagrans sobre larvas de primeiro estádio A. vasorum em condições laboratoriais no meio ágar-água 2 por cento. RESULTADOS: Ao final do experimento, os percentuais de redução das L1 de A. vasorum observados foram de: 53,5 por cento (24h) e 71,3 por cento (48h) CONCLUSÕES: O extrato bruto enzimático do fungo D. flagrans destruiu in vitro as L1, podendo ser utilizado como controle biológico desse nematóide.

INTRODUCTION: Angiostrongylus vasorum is a nematode parasite of domestic dogs and potentially of humans. METHODS: This study aimed to observe the predatory activity in vitro of a crude enzyme extract of the fungus Duddingtonia flagrans on first-stage larvae of A. vasorum in laboratory conditions on 2 percent water-agar. RESULTS: At the end of the experiment, the percentage reductions observed for A. vasorum L1 were 53.5 percent (24h) and 71.3 percent (48h). CONCLUSIONS: Crude enzyme extract of the fungus D. flagrans destroyed the L1 in vitro and can be used as a biological control for this nematode.

Destruição de larvas infectantes de Strongyloides venezuelensis pelos fungos Duddingtonia flagrans, Arthrobotrys robusta e Monacrosporium sinense / Destruction of Strongyloides venezuelensis infective larvae by fungi Duddingtonia flagrans, Arthrobotrys robusta and Monacrosporium sinense

INTRODUÇÃO: Strongyloides venezuelensis tem sido utilizado como um modelo para estudo da estrongiloidose humana. MÉTODOS: O objetivo deste trabalho foi comparar a capacidade predatória dos fungos nematófagos Duddingtonia flagrans (AC001), Arthrobotrys robusta (I-31) e Monacrosporium sinense (SF53) sobre larvas infectantes (L3) de Strongyloides venezuelensis em condições laboratoriais no meio ágar-água 2 por cento. RESULTADOS: Ao final do experimento, os percentuais de redução de L3 de Strongyloides venezuelensis observados foram de: 93 por cento (AC001); 77,2 por cento (I-31) e 65,2 por cento (SF53). CONCLUSÕES: Os fungos nematófagos foram capazes de capturar e destruir in vitro as L3, podendo ser utilizados como controladores biológicos de Strongyloides venezuelensis.

INTRODUCTION: Strongyloides venezuelensis has been used as a model for studying human strongyloidosis. METHODS: This study aimed to compare the ability of predatory nematophagous fungi Duddingtonia flagrans (AC001), Arthrobotrys robusta (I-31) and Monacrosporium sinense (SF53) and on infective larvae (L3) of Strongyloides venezuelensis in laboratory conditions on 2 percent water-agar medium. RESULTS: At the end of the experiment, the percentage reductions of Strongyloides venezuelensi L3 were: 93 percent (AC001), 77.2 percent (I-31) and 65.2 percent (SF53). CONCLUSIONS: The nematophagous fungi were able to capture and destroy the L3 in vitro and can be used as biological controllers of Strongyloides venezuelensi.

Atividade predatória dos fungos nematófagos Duddingtonia flagrans, Monacrosporium thaumasium e Artrobotrys robusta sobre larvas infectantes de Strongyloides stercoralis / Predatory activity of the nematophagous fungi Duddingtonia flagrans, Monacrosporium thaumasium and Arthrobotrys robusta on Strongyloides stercoralis infective larvae

INTRODUÇÃO: Strongyloides stercoralis é um nematoide que infecta grande parte da população mundial. MÉTODOS: O objetivo deste trabalho foi comparar a capacidade predatória dos fungos nematófagos Duddingtonia flagrans (AC001), Monacrosporium thaumasium (NF34) e Arthrobotrys robusta (I-31) sobre larvas infectantes (L3) de Strongyloides stercoralis em condições laboratoriais no meio ágar-água 2 por cento. RESULTADOS: Ao final do experimento, os percentuais de redução de L3 de Strongyloides stercoralis observados foram de: 83,7 por cento (AC001); 75,5 por cento (NF34) e 73,2 por cento (I-31). CONCLUSÕES: Os fungos nematófagos foram capazes de capturar e destruir in vitro as L3, podendo ser utilizados como controladores biológicos de Strongyloides stercoralis.

INTRODUCTION: Strongyloides stercoralis is a nematode that infects much of the population worldwide. METHODS: This study aimed to compare the ability of predatory nematophagous fungi Duddingtonia flagrans (AC001), Monacrosporium thaumasium (NF34) and Arthrobotrys robusta (I-31) on infective larvae (L3) of Strongyloides stercoralis in laboratory conditions on 2 percent water-agar. RESULTS: At the end of the experiment, the percentage reductions in Strongyloides stercoralis L3 were 83.7 percent (AC001), 75.5 percent (NF34) and 73.2 percent (I-31). CONCLUSIONS: The nematophagous fungi were able to capture and destroy the L3 in vitro and may be used as biological controls of Strongyloides stercoralis.

The ovicidal activity of fungi Pochonia chlamydosporia and Paecilomyces lilacinus on Taenia saginata eggs in laboratory trial / Atividade ovicida dos fungos Pochonia chlamydosporia e Paecilomyces lilacinus sobre / ovos de Taenia saginata em condições laboratoriais

The ovicidal activity (type 3 effect) of fungi Pochonia chlamydosporia (VC1 and VC4 isolated) and Paecilomyces lilacinus (PL1) on Taenia saginata eggs was compared in an experimental trial. T. saginata eggs were fixed onto Petri dishes containing 2% water-agar (2% WA) and fungal isolates, and onto Petridishes without fungus as control. The ovicidal activity of these fungi was evaluated after being incubated for 5, 10 and 15 days. From the beginning of the interaction to the end of the trial, both P. chlamydosporia(VC1 and VC4) and P. lilacinus (PL1) fungi demonstrated ovicidal activity (p<0,05) when compared to the control. However, after 15 days of incubation the P. lilacinus fungus showed higher ovicidal activity (effect of type 3) when compared to P. chlamydosporia. This study showed that both fungi P. chlamydosporia (VC1and VC4) and P. lilacinus (PL1) are capable in killing eggs of T. saginata, therefore these fungi might be considered as potential candidates for biological control of this cestoda.

A atividade ovicida (efeito tipo 3) dos fungos Pochonia chlamydosporia (isolados VC1 e VC4) e Paecilomyceslilacinus (PL1) sobre os ovos de Taenia saginata foi investigada, em condições laboratoriais. Os ovos de T. saginata foram colocados em placas de Petri contendo o meio agar-água 2% (AA 2%) com os isolados fúngicos e, também, em placas de Petri sem fungos, como controle. A atividade ovicida desses fungos foi avaliada depois de 5, 10 e 15 dias de incubação. Ao final do experimento, os fungos P. chlamydosporia (VC1 e VC4) e P. lilacinus (PL1) demonstraram atividade ovicida (p<0,05) quando comparados com o controle. Contudo, aos 15 dias de incubação o fungo P. lilacinus demonstrou maior atividade ovicida (efeito do tipo 3) em relação ao P. chlamydosporia. Este estudo demonstrou que os fungos P. chlamydosporia (VC1 e VC4) e P. lilacinus (PL1) possuem a capacidade de destruir os ovos de T. saginata e, portanto, podem ser considerados como potenciais candidatos no controle biológico deste cestoda.